概述SDS-PAGE法测蛋白质相对分子质量的原理。
实验原理 SDS-PAGE即十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)： 在混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷量。
怎样利用sds-page法测定某种蛋白质的分子量如下：电泳定义：带电荷的颗粒在电场的作用下向其电 性相反的的方向移动。电泳分类： 按电荷量分离 按分子量分离 按等电点分离。SDS-PAGE应用：测分子量；分离鉴定。
如果没有SDS使其负电荷一致，可能会使有相近分子量的蛋白质。分布于不同的位置，此种电泳法为原态胶体电泳（Native-PAGE）。进行电泳时，分子量较小的较容易落下，相反的分子量较大的则卡在起点附近。
[原理]十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate， 简称SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质的分子量，是六十年代末Weber和Osborn在Shapiro等人在实验基础上发展起来的一项新技术。
SDS-PAGE原理
1、原理：将蛋白质溶液与SDS（十二烷基硫酸钠）混合，SDS为界面活性剂会破坏蛋白质的二级结构使其变性，并包覆变性蛋白质，使其带有一致的负电荷（大约每两个氨基酸一个SDS）和一致的形状（长条形）。
2、SDS-PAGE是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成。
3、基本原理：聚丙稀酰胺是由丙稀酰胺（acrylamide）和N，N-亚甲基双丙稀酰胺（N，N’-methylenebisacrylamide）经共聚合而成。
4、SDS-PAGE凝胶电泳原理是聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂N，N’一亚甲基双丙烯酰胺在催化剂过硫酸铵，N，N，N’，N’四甲基乙二胺作用下，聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
sds-page凝胶电泳怎么制备
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
凝胶制备：用两块电泳玻璃板制成垂直板槽（不能漏胶），垂直放置。将配制好的分离胶溶液倒入，滴加入无离子水，待凝胶聚集后，倒出无离子水，用吸水纸吸干，倒入浓缩胶，再插入梳子。
(2)中的Buffer应完全浸没琼脂糖凝胶，在上样孔中加入Marker和样品，120V电泳（通常电泳时间在半小时以内）。注意，上样孔应在负极同侧。（4）显像：将电泳后的凝胶进行紫外成像，拍照记录。（5）胶回收，根据需要选择。
因此，各种蛋白质 SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，只是分子量的函数。这种电泳方法称为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS—PAGE)。
sds-page凝胶电泳原理
1、SDS-PAGE凝胶电泳原理是聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺和交联剂N，N’一亚甲基双丙烯酰胺在催化剂过硫酸铵，N，N，N’，N’四甲基乙二胺作用下，聚合交联形成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。
2、SDS—PAGE可分为圆盘状和垂直板状、连续系统和不连续系统。本实验采用垂直板状不连续系统。所谓“不连续”指电泳体系由两种或两种以上的缓冲液、pH和凝胶孔径等所组成。
3、凝胶电泳是通过电场作用将带负电荷的蛋白质样品在凝胶中进行分离的过程，在电场的作用下，带负电荷的蛋白质会向阳极迁移。
4、在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS， SDS能断裂分子内和分子间氢键，破坏蛋白质的二级和三级结构，因而蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中， 与SDS分子按比例结合，形成带负电荷的蛋白质复合物。
5、sds-page凝胶电泳原理是根据检体中蛋白质分子量大小的不同，使其在电泳胶中分离。SDS是阴离子去污剂，作为变性剂和助溶试剂，它能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白分子的三级结构。
6、作用原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛效应，它有两种形式，一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶，蛋白质在电泳中保持完整的状态，蛋白在其中依三种因素分开：蛋白大小，形状和电荷。
SDS-PAGE电泳试剂配制
试剂：5x样品缓冲液(10ml)：0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH8)，5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。可在4℃保存数周，或在-20℃保存数月。
SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
其配制步骤如下： 将250 mM Tris-HCl (pH 8) 和10 % (W/V) SDS 分别称取一定量，放入10 mL塑料离心管中。 加入0.5 % (W/V) BPB，称取一定量，放入上述离心管中。
SDS-PAGE试剂：见电泳实验。匀浆缓冲液：0M Tris-HCl(pH 8)Oml；10%SDS 0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 8ml。转膜缓冲液：甘氨酸 9g；Tris 8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000ml。
试剂准备：SDS-PAGE试剂：见电泳实验。匀浆缓冲液：0M Tris-HCl(pH 8)0ml；10%SDS 0ml；β-巯基乙醇 0.2ml；ddH2O 8ml。
