质粒抽提原理
在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度、试剂等的原因，可能使质粒DNA链发生断裂。
小量提取质粒DNA的原理主要包括： 裂解细胞和核糖体，释放出质粒DNA。常用SDS和蛋白酶K破坏细胞结构，裂解细胞和核糖体，释放出各种DNA，包括质粒DNA、宿主染色体DNA等。去蛋白。
现在的质粒抽提一般是利用碱裂解法，是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异达到分离目的。高pH使质粒DNA和染色体DNA变性，同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性，质粒DNA较小，很容易复性成双链。
提质粒的目的是去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。酶切的目的是对粘末端的DNA分子和载体分子进行切割，以获得相应的粘末端连接。酶切可以是单酶切也可以是双酶切。
质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
如何去除质粒中的内毒素
1、消除的方法一般是高温处理，玻璃器皿250度或者180度处理。如果是样品珍贵的，也可以用去除内毒素的凝胶颗粒吸附。问题四：怎样能去除水的的内毒素(求助) 去除水中的内毒素（热源），可以选用超纯水系统来去除。
2、取50mL菌液，置于50mL离心管中，4000rpm 4℃离心5min，彻底弃除上清。 加入3mL溶液A，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心5min，彻底弃除上清。
3、内毒素不是蛋白质，因此非常耐热。在100℃的高温下加热1小时也不会被破坏，只有在160℃的温度下加热2到4个小时，或用强碱、强酸或强氧化剂加温煮沸30分钟才能破坏它的生物活性。
4、用浓度为0.1mol/L的NaOH处理内毒素的效果，在37°C下，30分钟后可以去除内毒素的70%-80%，1小时后可以去除90%以上的内毒素。
5、从细胞中释放DNA，去除与DNA结合的蛋白质并快速使胞内核酸酶失活。如，酶水解蛋白和RNA 层析液中吸收、释放DNA 利用乙醇或者异丙醇沉淀DNA去除盐离子。
qiagen质粒中抽试剂盒去内毒素吗
1、不含内毒素缓冲液能够避免LPS分子与QIAGEN-tip中的树脂结合，从而使每微克质粒DNA中含有的内毒素少于0.1EU。
2、质粒DNA浓度700ng/ul（注意：①溶解于无菌双蒸水或超纯水；②无内毒素），我用QIAGEN试剂盒除去的内毒素 操作流程 先将细胞接种到细胞培养板，细胞汇合度在70%左右，再进行转染。
3、一般适用于5ml以下菌液。而质粒中提，在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素，获得的质粒可以用于细胞转染，常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同，可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。
4、提取出来的质粒纯度高，杂质少，无内毒素，是直接转染级别的。那么质粒小提就是小量制备，小量抽提了，提取的方法有碱裂解法等，也可以用小量质粒提取的纯化柱，现在有很多国内的生物公司自己也在生产了，质量还不错。
5、因此，性价比是最重要的因素。大部分的质粒提取试剂盒所得产物可分为如下几个级别：高级转染级：这是最高纯度的去内毒素的质粒纯化，主要使用于基因治疗，cell显微注射，原代细胞转染等。
6、实验室一直都是用日常型质粒抽提试剂盒，转染细胞没问题。我觉得只要是注意以下2点就可以了：1，注意大肠杆菌(Escherichia coli)本身的污染，收集菌体沉淀时防止菌液散落，经常用75%的乙醇擦拭手套。
RNA的提取方法步骤及原理.
1、）RNA选择性地进入无DNA和蛋白质的水相，容易被异丙醇沉淀浓缩，对大量或少量组织的细胞RNA提取，均甚合适；3）可在3小时以内处理大量样品，省略了氯化铯密度梯度超速离心步骤及其它方法使用的长时间选择性乙醇沉淀或LiCl沉淀。
2、RNA抽提原理 简单地讲，RNA抽提包含样品的裂解和纯化两大步骤。裂解是使样品中的RNA游离在裂解体系中的过程，纯化则是使RNA与裂解体系中的其它成分，如DNA、蛋白质、盐及其它杂质彻底分离的过程。
3、高温灭菌两次可以破坏RNA酶的复性过程.虽然RNA酶极易复性，但两次连续的高温会打乱它的复性历程，从而使RNA酶失活。DEPC是RNA酶的非竞争性抑制剂。DEPC可以与RNA酶的活性中心的组氨酸咪脞环上的N结合，从而使RNA酶失活。
4、trizol法提取rna原理：在匀质化或溶解样品中，Trizol试剂可保持RNA的完整性，同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后，裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后，RNA通过异丙醇沉淀回收。
5、原理：稀碱法提取酵母RNA的原理基于以下几个关键步骤：细胞破碎：酵母细胞首先被破碎，使细胞内的RNA释放出来。离心：通过离心步骤，将破碎细胞产生的细胞壁残渣和细胞器沉淀分离出来，得到含有RNA的上清液。
6、目的：掌握Trizol提取总RNA的原理和步骤，学习电泳鉴定总RNA的方法。原理：RNA是核酸，具有较好的水溶性。提取RNA首先破碎细胞，然后用提取液将RNA溶出，反复抽提去除蛋白质，加入乙醇沉淀RNA，将RNA沉淀溶解备用。
论述如何确保质粒提取的质量和数量。
用琼脂糖凝胶电泳鉴定质粒DNA。琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。
和菌的生长状况有关，提取时的温度有关要低温，还需要加溶液，操作的时候要温和。对数期菌的 生长状况和数量最佳，有利于提取质粒。
不利于质粒提取量和质量。根据查询环保在线网得知，使用过多的菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，此时可减少菌体用量或增加溶液PP2和P3的用量。
真核生物(如小鼠)的质粒如何提取,请写下详细步骤,谢谢
构建小鼠CD40Ig基因真核表达质粒 1 小鼠脾脏总RNA的提取：将小鼠以颈椎脱臼法处死，取出脾脏，加入液氮研磨后，用Trizol试剂提取总RNA，方法按产品说明进行。
质粒抽提方法即去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。
操作步骤： 本实验方法适用于从 1-10ml 过夜培养的大肠杆菌菌液中提取质 粒。
得到的质粒样品一般用含RNase(50 ug/ml)的TE缓冲液进行溶解，不然大量未降解的RNA会干扰电泳结果的。 琼脂糖电泳进行鉴定质粒DNA时，多数情况下你能看到三条带，但千万不要认为你看到的是超螺旋、线性和开环这三条带。
