怎样鉴定细胞凋亡
1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有出芽现象。丫啶橙染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。
2、根据凋亡细胞固有的形态特征，人们已经设计了许多不同的细胞凋亡形态学检测方法。 1 光学显微镜和倒置显微镜 (1) 未染色细胞：凋亡细胞的体积变小、变形，细胞膜完整但出现发泡现象，细胞凋亡晚期可见凋亡小体。贴壁细胞出现皱缩、变圆、脱落。
3、所以可以用FITC偶联的annexinV鉴别凋亡细胞和活细胞。坏死细胞的PS也会从细胞膜的内表面翻转到细胞膜的外表面，annexinV也能识别坏死细胞表面的PS，所以 annexinV无法区分坏死细胞和凋亡细胞 。
4、DNA ladder法就是凝胶电泳DNA片段测定法 DNA Ladder 法检测细胞凋亡方法如下：凋亡处理：细胞经凋亡处理后，收集细胞（包括悬浮细胞），用70%乙醇-20度固定2h。
5、细胞碎片被周围的活细胞吞噬，而不是被专职的巨噬细胞所清除。细胞坏死则是细胞受到急性损伤而出现的死亡，表现为细胞胀大，裂解，释放出大量内含物，引起炎症，坏死细胞最终被巨噬细胞清除。
核酸探针
1、探针就是DNA弹针。用于检测特定的DNA片段。基因探针，即核酸探针，是一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。
2、探针是一小段单链DNA或者RNA片段（大约是20到500bp），用于检测与其互补的核酸序列。双链DNA加热变性成为单链，随后用放射性同位素（通常用磷-32）、荧光染料或者酶（如辣根过氧化物酶）标记成为探针。
3、DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多，有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列，或某一非编码序列。
4、．核素标记物 放射性核素是目前应用最多的一类探针标记物。放射性核素的灵敏度极高，可以检测到10-14～10-18克的物质，在最适条件下可以测出样品中少于1000个分子的核酸含量。
5、基因工程探针 原核表达法 原核表达法是指利用质粒将目标DNA序列插入宿主细胞，使得宿主细胞可以产生带有目标DNA序列的蛋白质或RNA序列。这种方法最适合用于大量表达带标签的探针，例如荧光探针、酶标记探针等。
6、核酸探针的标志性特征是有同位素或非同位素标记物。
原位杂交的主要程序?
1、减低背景染色 在原位杂交实验程序中，如何减低背景染色是一个重要的问题。ISHH中背景染色的形成是诸多因素造成的。杂交后的酶处理和杂交后的洗涤均有助于减低背景染色。
2、在ISHH，整个实验周期是比较长的，实验程序也比较繁杂，而杂交在ISHH整个实验中可被认为是“短兵相接”的一步。
3、RNA原位杂交不同于DNA原位杂交主要有：(1)检测目的不同：RNA原位杂交检测和分析的主要为内源性基因，包括细胞内固有基因、异常基因和变异基因。
4、Primer3比较有名的在线引物设计程序。 PrimoPro4在线PCR引物设计java系列软件。 WebPrimer斯坦福大学提供的在线引物设计软件。
