非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)应该注意哪些问题
垂直胶的点样孔形成于两块玻璃板之间。在非常薄的胶中，移液器移液头甚至不能插入到两块玻璃板之间。注意甘油！把移液头置于样品孔上方，样品会沉入到孔中。点样之前，一定要把垂直型聚丙烯酰凝胶的点样孔冲洗干净。
加样时要注意：每空的上样量不能过大，以免样品溢出，造成各泳道相互污染；为了避免边缘效应，在未加样的泳道加入等量的样品缓冲液。
．SDS与蛋白质的结合按质量成比例(即：4g SDS /g蛋白质)，蛋白质含量不可以超标，否则SDS结合量不足。2．用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白质相对分子量时，必须同时作标准曲线。不能利用这次的标准曲线作为下次用。
）还原SDS处理：在上样buffer中加入SDS和DTT（或β-巯基乙醇）后，蛋白质构象被解离，电荷被中和，形成SDS与蛋白相结合的分子，在电泳中，只根据分子量来分离。
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)原理是什么?
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis， PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉双丙烯酰胺在催化作用下形成的三维网状结构物质。
2、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下， 对保持活性的蛋白质进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于同工酶的鉴定和提纯。
3、wb实验原理如下：WB实验是通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）将混合蛋白质样品分离后，利用特殊虹吸或电场装置印迹至固相介质（例如PVDF膜）上，再以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原。
4、sds复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，只是棒长的函数。这种电泳方法称为sds聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称sds—page)。
5、作用原理聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状结构，具有分子筛效应，它有两种形式，一种是非变性聚丙烯酰胺凝胶，蛋白质在电泳中保持完整的状态，蛋白在其中依三种因素分开：蛋白大小，形状和电荷。
6、SDS-PAGE是十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳，是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术，用于分离蛋白质和寡核苷酸。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成。
SDS-PAGE样品上样前为什么要加热
1、通过加热和SDS可以使蛋白质变性，多亚基的蛋白质也将解离为单亚基。同时还原剂可以切断蛋白质中的任何一个二硫键（使二硫键还原）。经过这样处理的样品中的肽链都是处于无二硫键连接的，分离的状态。
2、总之，将SDS-PAGE的样品加热至100°C，是为了使蛋白质变性，并与SDS充分结合，从而在电泳中实现更好的分离效果。
3、加热是SDS-PAGE测量蛋白质复合物分子量的必须步骤。通过加热，促进蛋白形成椭圆结构，椭圆的短轴一致，长轴依据蛋白的分子量而不同，在电泳中表现为不同的泳动速率，与蛋白标准对照，从而达到测定分子量的目的。
4、不一定，跟你做的蛋白自身性质有关，有些结构很稳定的蛋白加热可以帮助完全变性，但也有些蛋白在加热以后反而不溶了。最好跑个对照看看那种办法适合你。
