蓝白斑筛选原理 蓝白斑筛选原理PPT

蓝白斑筛选问题!!

选择正确的斑点:在开始蓝白斑筛选之前,第一步就是选择正确的斑点,这些斑点会最大化图案细节,使其更加清晰。调整斑点大小:在确定斑点位置后,接下来就要调整斑点的大小,以使图案更加清楚可见。

这种重组子的筛选,称为蓝白斑筛选。缺点 由于多种原因,一些白色菌落可能不包含所需的重组质粒。

假阳性:由于时间太长,氨苄青霉素被阳性大肠杆菌降解,不抗氨苄青霉素的大肠杆菌就会长出来形成白斑,而这些大肠杆菌不含载体和外源基因,因此是假阳性。

简述α互补和蓝白斑筛选的原理

1、在重组质粒中插入片段使α-肽失活,可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。不带有插入片段的载体,表达有功能的β-半乳糖苷酶,所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因,导致内源α-肽失活。

2、而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,称为蓝白斑筛选。

3、蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。

蓝白斑筛选的原理是什么?

蓝白斑筛选的机理 由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别,它在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导形成蓝色菌落。

而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,称为蓝白斑筛选。缺点 由于多种原因,一些白色菌落可能不包含所需的重组质粒。

利用乳糖操纵子系统。野生型埃希氏大肠菌(E.Coli)产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。

在蓝白斑筛选实验中,能够使得菌落清晰地显示蓝斑或者白斑,颜色对比明显,能够清晰辨别出目的菌落。蓝白斑筛选的原理分类生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。

在重组质粒中插入片段使α-肽失活,可在指示平板上通过颜色筛选鉴别。不带有插入片段的载体,表达有功能的β-半乳糖苷酶,所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因,导致内源α-肽失活。

将目的基因插入LacZ靠近5‘端有多克隆位点,是否成功插入有待蓝白斑筛选鉴定。

蓝白菌斑的原理是什么?

1、选取具有青霉素抗性基因的质粒作为运载体,将目的基因插入该种质粒中构建基因表达载体,这样目的基因与青霉素抗性基因就是捆绑在一起的了,也就是说质粒中存在青霉素抗性基因成为了该质粒中存在目的基因的充要条件。

2、蓝白斑筛选的原理 分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等。