磁珠法核酸提取的磁珠法核酸提取过程
磁珠法核酸提取一般可以分为四步：裂解——结合——洗涤——洗脱。
加入40 μL洗脱液，振荡至磁珠充分散开，60℃温育2min，振荡混匀30 sec。 将离心管置于磁力架上，待磁珠完全吸附后，小心吸取上清液至一新的5mL离心管中，提取的核酸可直接用于下游实验，或-70℃保存 备用。
把吸附在特异载体上的核酸用洗脱液洗脱下来，分离得到纯化的核酸。
整个提取流程只有四步，大多可以在36-40分钟内完成；③安全无毒，不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂，对实验操作人员的伤害减少到最少，完全符合现代环保理念；④磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸纯度高、浓度大。
怎么把mrna从rna中纯化
有专门的试剂盒，这个一般都是买的，用oligo(dT)亲和mRNA（polyA结构）。
RNA抽取一般使用Trizol法抽提：Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。
） 总 RNA 的提取 RNA 提取方法：APGC法或NP-40或应用试剂盒提取总RNA 2）mRNA的分离 高等真核生物 mRNA 分子的 3 端均有 poly(A) 尾，将总RNA通过寡聚（DT）纤维柱分离mRNA或利用磁珠法制备纯mRNA。
真核生物mRNA测序
真核生物mRNA含有poly-A尾，因此最常用的富集真核生物mRNA的方法就是采用附着poly-T oligo的磁珠从total RNA 中抓取mRNA。
因为真核生物和原核生物的基因有编码区和非编码区。在mRNA测序中，非编码RNA的检出占比有所升高，在两种建库方式中，假基因的检出占比较为恒定。
真核生物全基因组测序通常采用以下几种方法： 短片段序列拼接法(Shotgun sequencing)。先将基因组DNA机械粉碎为较短的片段，再进行序列测定，最后通过生物信息学的方法拼接成完整的基因组序列。这种方法较常用。
翻译调控： 原核生物：基因表达的调控主要在转录水平上进行； 真核生物：由于RNA较为稳定，除了存在转录水平的调控以外，在翻译水平上也进行各种形式的调控。
从RNA抽提到制成cDNA的全过程
1、设计并合成一段寡核苷酸引物，该引物应与感兴趣的mRNA序列的5端富含嘌呤的区域互补。将RNA变性并电泳，将mRNA从变性胶中切割下来，然后进行凝胶电泳以确认其大小。
2、用等量酚：氯仿对含有磷酸化cDNA(来自步骤6)的反应物进行抽提。 Sephadex G-50用含有10 mmol/L NaCl的TE(pH6)溶液进行平衡，然后通过离子柱层析将未掺入的dNTP和cDNA分开。
3、是的，得到的是全体mrna的cdna的库。然后通过pcr手段获得需要的目的片段。
4、在tRNA3-末端上，按5→3方向，合成一条与RNA模板互补的cDNA单链，它与RNA模板形成RNA-cDNA杂交体。随后又在反转录酶的作用下，水解掉RNA链，再以cDNA为模板合成第二条DNA链。至此，完成由RNA指导的DNA合成过程。
5、将提取的总RNA在寡聚脱氧核苷酸[oligo（dT）]纤维素中进行亲和层析，分离获得mRNA。（2）cDNA第一链的合成：所有cDNA第一链的合成方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶（反转录酶）来催化反应。
6、pcr技术的基本原理和过程如下：qRT-PCR（定量逆转录聚合酶链式反应）是利用逆转录酶将RNA模板转录为cDNA，再使用Taqman探针或SYBRGreen等荧光染料检测cDNA的定量过程。以下是关于qRT-PCR原理的更加详细介绍。
rnapulldown实验原理
1、RNA pull down实验原理：先将体外转录的RNA结合到Beads上，再将RNA-Beads和细胞裂解液孵育，这样与目标RNA结合的蛋白便会一起吸附在Beads上。
2、 RNA pull-down其目的是检测与RNA互作的蛋白。
3、免疫沉淀：使用抗体结合抗原的方法，将RNA与靶向蛋白质一同沉淀下来。后续检测：通过Western blot、质谱、RNA-Seq等技术，检测RNA与蛋白质的相互作用，并鉴定结合的位置和强度。
4、RNA-pull down：是将RNA进行标记(如生物探针标记)再与胞浆蛋白提取液共同孵育，从而形成RNA-蛋白质复合物，通过SDS-PAGE分离蛋白质，最后通过Western blot或质谱检测蛋白质。用于寻找与目的RNA结合的蛋白。实验思路见参考文献[14]。
磁珠法提取核酸的原理
1、磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。
2、磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。
3、核酸提取均采用磁珠法。1）磁珠提取的原理：将磁珠上标记特异性吸附核酸的物质特异性吸附核酸，并通过磁分离技术将病毒核酸从裂解液中提取出来。
4、首先，磁珠和小核酸片段（按照实验设计好的核酸）链接成整体。然后，加入目标溶液（包含要选择的DNA片段）原理：核酸分子之间 碱基配对，相互结合。处理：最后将磁珠分离，对应的DNA片段也一起被分离了。
5、利用裂解液促使细胞破碎，使细胞中的核酸释放出来。把释放出来的核酸特异吸附在特定的硅载体上，这种载体只对核酸有较强的亲和力和吸附力，对其他生化成分如蛋白质、多糖、脂类则基本不吸附，因而离心时被甩出柱子。
