提取质粒需要注意哪些方面?
1、利用氯霉素抑制染色体的复制，而不抑制质粒的复制这一特点，在低拷贝质粒（如pUC19）的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。RNA 的去除，首先是使用 RNase 消化。
2、建议使用OD600的0和0之间的细菌提取质粒。 使用富含营养素的介质时，应注意确保细菌密度不超过0的OD600，最后菌液OD600为0.4。 在推荐的OD范围之外使用高密度培养可能会超过纯化体系。
3、没有菌落则加入10μl质粒转化。另不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态）；⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
4、认真看。质粒提取需要注意的提到了。溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 0； 溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS； 溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。 让我们先来看看溶液I的作用。
质粒提取的注意事项
1、利用氯霉素抑制染色体的复制，而不抑制质粒的复制这一特点，在低拷贝质粒（如pUC19）的培养过程中添加氯霉素可以大大提高得率。RNA 的去除，首先是使用 RNase 消化。
2、建议使用OD600的0和0之间的细菌提取质粒。 使用富含营养素的介质时，应注意确保细菌密度不超过0的OD600，最后菌液OD600为0.4。 在推荐的OD范围之外使用高密度培养可能会超过纯化体系。
3、注意事项： 溶液 II、溶液 III 如出现结晶或者沉淀，可在 37℃水浴中加热几分钟溶解，直至液体恢复澄清。 提取的BIOG质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
4、溶液溶液三冰浴效果好。溶液二现用现配。溶液三加入后，注意复性时间，太长太短都不行。转管吸取上清液时，不要带入蛋白沉淀，宁缺勿滥。最后干燥时，时间也不宜过长。
5、认真看。质粒提取需要注意的提到了。溶液I，50 mM葡萄糖 / 25 mM Tris-Cl / 10 mM EDTA，pH 0； 溶液II，0.2 N NaOH / 1% SDS； 溶液III，3 M 醋酸钾 / 2 M 醋酸。 让我们先来看看溶液I的作用。
6、质粒DNA的小量制备注意事项：如有必要，在酶切反应液中加人1 μl 10 mg/ml RNA酶溶液（不含DNA酶）以去除污染的RNA。在使用前，在溶液Ⅳ（洗涤液）加入40ml无水乙醇，然后在瓶盖上作好记号。
质粒提取的基本原理
在DNA重组中，质粒或经过改造后的质粒载体可通过连接外源基因构成重组体。 从宿主细胞中提取质粒DNA，是DNA重组技术中最基础的实验技能。分离质粒DNA有三个步骤：培养细菌使质粒扩增，收集和裂解细菌，分离和纯化质粒DNA。
原理：将细菌悬浮于含有和能消化细胞壁的溶菌酶的缓冲液中，然后加热到使其裂解。加热除了破坏细菌外壁，还有助于解开DNA链的碱基配对，并使蛋白质和染色体DNA变性。
抽提质粒DNA常用碱裂解法，它是一种应用最为广泛的制备质粒DNA的方法，其基本原理为：在碱性条件（pH15）下，线性染色体DNA的双螺旋结构解开而变性，质粒DNA的氢键虽然断裂，但两条互补链彼此缠绕，紧密结合在一起。
其基本原理为：当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时，蛋白质与DNA 发生变性，当加入中和液后， 质粒 DNA 分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA 不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。
质粒的提取
1、质粒提取是指去除 RNA，将质粒与细菌基因组 DNA分开，去除蛋白质及其它杂质，以得到相对纯净的质粒。 目录 质粒提取原理 质粒是细胞内的一种环状的小分子DNA，是进行DNA重组的常用载体。
2、①差速离心。蛋白质等物质可用酚-氯仿变性沉淀，然后用高浓度乙醇提取DNA，然后再溶解。高速离心，可分离染色体DNA和质粒DNA。
3、从具体操作方法分可以分为碱裂解法、煮沸法、牙签法等。在氢氧化钠（pH10-16碱性环境）和去污剂SDS的作用下，细菌蛋白质变性，细胞破裂，细菌染色体DNA变性，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变形。
4、小量提取质粒DNA的原理主要包括： 裂解细胞和核糖体，释放出质粒DNA。常用SDS和蛋白酶K破坏细胞结构，裂解细胞和核糖体，释放出各种DNA，包括质粒DNA、宿主染色体DNA等。去蛋白。
碱性裂解法提取质粒原理
1、实验原理：碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA 与线性染色体DNA 在拓扑学上的差异来分离它们。
2、碱裂解法的原理是：高PH 的溶液会使细胞壁粕类从而使得DNA和蛋白质变性。将细菌悬浮液暴露于高pH值的强阴离子洗涤剂中，会使细胞壁破裂，染色体DNA和蛋白质变性，将质粒DNA释放到上清中。
3、碱裂解法分离提取质粒DNA的基本原理是：（）A.碱性条件下染色体DNA变性，去除变性条件后，可以复性；而质粒DNA则相反。B.碱性条件下质粒DNA变性，去除变性条件后，可以复性；而染色体DNA则相反。
4、其基本原理为：当菌体在NaOH 和SDS 溶液中裂解时，蛋白质与DNA 发生变性，当加入中和液后， 质粒 DNA 分子能够迅速复性，呈溶解状态，离心时留在上清中；蛋白质与染色体DNA 不变性而呈絮状，离心时可沉淀下来。
5、碱裂解法是提取质粒的最常用也最有效的方法，是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异达到分离目的。原理：高pH使质粒DNA和染色体DNA变性，同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性，质粒DNA较小，很容易复性成双链。
