RT-PCR检测方法的具体步骤
1、℃放置60min，70℃放置5min终止反应。3．稀释母液模板，进行PCR反应。
2、在RT-PCR中，一条RNA链被逆转录成为互补DNA，再以此为模板通过PCR进行DNA扩增。步骤：（一）预变性：破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级结构。
3、解RT-PCR有两种做法：条件具备的话可用kit进行一步法进行；若条件不太好的话可分两步进行逆转录再PCR。
4、PCR引物设计 PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。
5、RT-PCR实验，主要分为3步：total RNA的提取 mRNA的反转录 荧光定量PCR 消除DNA污染：按照说明书加入足量的Trizol，细胞过多会引起DNA污染。现在已经有去除基因组污染的反转录试剂盒，已经在很多实验室常用。你可以尝试一下。
rtqpcr原理及应用
原理：利用PCR高度的特异性，通过特定的引物能在复杂样品中得到的特定序列的DNA，而这种特定DNA的产量跟反应初始阶段模板量是直接相关的。简单说来。
RT-qPCR属于第二代PCR技术，与常规的PCR技术相比，RT-qPCR技术可对DNA起始模板进行定量，同时可以对整个扩增反应进行实时监控。
qpcr原理是在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。
RT-PCR在基因表达研究、病毒检测等领域广泛应用。qPCR是一种定量分析技术，可用于准确测量DNA或RNA的初始数量。它通过荧光探针或DNA染料监测PCR反应过程中的DNA合成量。qPCR可以提供准确的基因表达水平、病原体数量等信息。
rt-pcr原理如下：只要是利用相关技术提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用反转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板经行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。
rtPCR的作用
RT-PCR技术灵敏而且用途广泛，可用于检测细胞中基因表达水平，细胞中RNA病毒的含量和直接克隆 特定基因的cDNA序列。作为模板的RNA可以是总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物。
基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，然后将所获得的cDNA作为模板，设计引物进行扩增，是一种检测基因表达的常用方法。实时荧光定量PCR也就是Real-Time PCR，其最大的作用是检测样品中的初始DNA浓度。
RT-PCR一般情况下是指反转录PCR。基本操作过程是将所提取的RNA进行反转录，然后将所获得的cDNA作为模板，设计引物进行扩增，是一种检测基因表达的常用方法。
pcr 常用就是扩基因，提完rna后反转啊，那你扩来基因用做什么就需要你来看了。菌落PCR，也是扩，放大数目，好验证。
RT-PCR的原理是什么?有何用途?
1、RT-PCR简介 RT-PCR是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。首先经反转录酶的作用从RNA合成 cDNA，再以cDNA为模板，扩增合成目的片段。
2、RT-PCR：先用逆转录酶将mRNA合成cDNA，再以cDNA为模板进行扩增。
3、原理：RT-PCR 为反转录RCR（reverse transcription PCR）和实时PCR（real time PCR）共同的缩写。逆转录PCR，或者称反转录PCR(reverse transcription-PCR， RT-PCR)，是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形。
RT-PCR实验操作的注意事项
1、以电泳为基础的半定量RT-PCR本身是不可信的，作为实验的粗筛是可以的，但不能作为最终结果的，半定量RT-PCR应该再两 管中进行，除非内参基因和目的基因表达相同，长度差不多，GC含量相似，或者实在穷的要省PCR管和taq。
2、必须在无菌无尘环境下进行操作；检测人员必须通过国家临检中心业务培训并取得合格证书；必须拥有标准的的PCR荧光实验室；后PCR区PCR完成以后，应该留出一个专门用于反应后处理样品的地方。
3、RT-PCR 的关键步骤在是 RNA 的反转录，要求 RNA 模版为完整的且不 含 DNA、蛋白质等杂质。常用的反转录酶有两种，即鸟类成髓细胞性白细胞 病毒反转录酶和莫罗尼鼠类白血病病毒反转录酶。
