在色谱分离过程中,为什么不让柱内的液体流干和不让住内留气泡
1、流动相流干会导致柱床干涸，造成柱不可逆转损伤，气泡会引起基线不稳，鼓包。
2、装柱时液体流干会导致交换树脂因为缺少水而干裂。装柱的方法：将层析柱垂直装好，关闭柱底出口，在柱内注入约1cm高的柠檬酸缓冲液。
3、色谱柱填充过程中，固定相不能露出溶剂液面，也不能有气泡。首先，固定相露出液面，固定相中必然进入气泡。其次气泡进入后，将会形成沟流，样品和流动相顺着气泡表面直接短路过去了，导致分离效果下降，拖尾。
4、色谱柱填装紧与否对分离效果很有影响，若松紧不均，特别是有断层时，影响流速zhi和色带的均匀，但如果装时过分敲击，色谱柱填装过紧，又使流速太慢。
5、沿色谱柱壁加样或加洗脱液，防止吸附剂溅起；洗脱过程中不能让液体流干。
层析柱原理和使用方法
柱层析原理：柱层析法的分离原理是根据物质在硅胶上的吸附力不同而使各组分分离。一般情况下极性较大的物质易被硅胶吸附，极性较弱的物质不易被硅胶吸附。
柱层析的基本操作过程：主要包括常压分离、减压分离和加压分离 3种模式。常压分离是最简单的分离模式方便、简单 ，但是洗脱时间长。
上样。干法湿法都可以。海沙是没必要的。上样后，加入一些洗脱剂，再将一团脱脂棉塞至接近硅胶表面。然后就可以放心地加入大量洗脱剂，而不会冲坏硅胶表面。过柱和收集。柱层析实际上是在扩散和分离之间的权衡。
吸附层析 吸附柱层析 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。
用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。如果样品与硅胶的吸附比较强的话 ，就不容易流出 ，这时可以采用氧化铝作固定相。
在层析中为什么在提取液中加干燥剂
反应产物中有水，或者需要反应结束后加无机酸去中和（例如将羧酸钠变成羧酸）的话，则需要进行分液，萃取再分液，将有机相合并。这时候的有机相里面肯定多少有些水分，所以在蒸馏或者旋蒸之前要干燥。
无水硫酸钠有强烈的吸水性，吸水后常以水合物形式存在，如十水硫酸钠(Na2SO4·10H2O，俗称芒硝)。植物色素提取多用乙醇或丙酮等有机溶剂，其结果是脂溶性色素被提取而水的存在使水溶性色素流失。
干燥气体：将无水硫酸钠装如干燥管，将气体通过即可以吸出水分。去除有机液体的水分（如醇）：直接将无水硫酸钠投入试液中，滤去吸水后的固体既可。
滤纸条上的滤液细线，不能触及层析液的原因：滤纸条上的滤液细线如触及层析液，滤纸上的叶绿体色素就会溶解在层析液中，实验就会失败。
过滤。干燥完毕，使用漏斗加滤纸过滤，将无水硫酸钠或者无水硫酸镁除去，得到不含无机盐和水分的有机相。旋蒸。将过滤好的有机相上旋蒸，除去有机相，我们就可以得到化合物的粗品了。
利用葡聚糖凝胶分离蛋白
1、一般是磷酸盐，如：K2HPO4-KH2PO4，要注意的有两点：一是pH值，不要选在等电点；二是盐浓度，不能超过柱子的允许范围（手册上有）。另外，这种柱子很娇气，也很贵，使用时一定要小心。
2、前者是通过电泳分离蛋白质，整个凝胶是一个交联的整体，所有的分子都只能从其中的网孔经过，因此分子量大的体积大，走的慢，分子量小的体积小，走的快。
3、在这个实验中我们使用的是血红蛋白和核黄素，这两种物质都是有颜色的（血红蛋白是红色的，核黄素是黄色的）以方便我们的试验。但在研究的试验中有些混合有机物是没有颜色的。
仪器分析——层析技术一、层析技术的原理和分类
1、层析技术的分类 (1)按流动相的状态分类：用液体作为流动相的称为液相层析，或称液相色谱；以气体作为流动相的称为气相层析，或称气相色谱。
2、吸附层析 吸附柱层析 吸附柱层析是以固体吸附剂为固定相，以有机溶剂或缓冲液为流动相构成柱的一种层析方法。
3、层析法的原理如下：层析法利用混合物中各组分的物理化学性质间的差异（溶解度、分子极性、分子大小、分子形状、吸附能力、分子亲合力等），使各组分在支持物上集中分布在不同区域，借此将各组分分离。
4、层析原理层析利用物质在固定相与流动相之间不同的分配比例，达到分离目的的技术。层析对生物大分子如蛋白质和核酸等复杂的有机物的混合物的分离分析有极高的分辨力。层析（chromatography）是“色层分析”的简称。
凝胶渗透柱层析
1、凝胶渗透层析就是按照溶质分子的大小不同而进行分离的一种层析技术。当溶质分子大小不同的样品溶液通过凝胶柱时，由于凝胶颗粒内部的网络结构具有分子筛效应，分子大小不同的溶质就会受到不同的阻滞作用。
2、首先将凝胶层析柱连接到洗涤缓冲液的贮液罐中。其次打开贮液罐的出口阀门，让洗涤缓冲液从柱底流入柱内，直至柱内液面达到柱顶。
3、基本原理：凝胶过滤层析也称分子筛层析、排阻层析。是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。
4、按照相对分子质量进行判断。凝胶柱层析是用于酶等物质进行分离提纯的方法，其在进行蛋白质洗脱时，其次序是分子量大的，极性大的先流出，所以其是可以按照相对分子质量进行判断，其是从色谱柱的顶端向下运动时进行洗脱的。
5、凝胶过滤层析原理是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用，根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。凝胶过滤层析是一种溶液分离技术，常用于生物化学、分子生物学和生物技术领域中的分离纯化和鉴定分子量的方法。
6、还可以使硅胶充分沉降，让层析效果更好。等柱子没有气泡后在上样用洗脱液进行层析。若柱中留有气泡或各部分松紧不匀（更不能有断层）时，会影响渗透速度和显色的均匀。去除就是用玻璃棒搅拌，赶走气泡。
