ELISA试剂盒检测原理
ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
elisa实验原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。
这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体；加入待测检体、带有酶的抗原，与塑胶孔盘上的抗体专一性键结。
检测原理：本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-4单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的IL-4会 与单抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。
ELISA的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
阻断内源性过氧化物酶的原理
用3%过氧化氢孵育5~10分钟，消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗，5分钟×2。
直接法的优点是简便，商品用的凝集素药盒已能购得。但灵敏性不够高。 将凝集素直接与切片中的相应糖基结合，而将标记物结合在抗凝集素抗体上。（1）脱蜡至水。（2）用含3%的H2O2的甲醇阻断内源性过氧化物酶10min。
以1分钟内398nm吸光度上升0.01为一个酶活性单位，结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。过氧化物酶（Peroxidase，POD）活性测定POD活性测定采用愈创木酚法（Lurie等，1997)。
从而导致过氧化物酶体功能异常，由于过氧化物酶体在细胞内的重要作用，Pex基因突变会影响多个组织和器官的功能，包括大脑、肝脏和肾脏等，这解释了过氧化物酶体生物合成障碍3a型患者常见的多系统受累表现。
：细胞固定。用醋酸/甲醇或95%酒精固定20-30min。3：取已固定的细胞盖片，用PBS洗5min，浸入37℃的0.75%H2O2-PBS中3min，以阻断内源性过氧化物酶。4：PBS振洗2次，每次3min。
为止，在免疫组化染色前，都必须对内源性过氧化物酶进行抑制。当然，对它们进行彻底的消除是不行的，因为抑制太厉害，对抗原也会有相同的抑制作用。
免疫组化实验中DAB显色的原理?
1、DAB染色法也叫二氨基联苯胺法，用于检测细胞中过氧化物酶的活性部位。原理：细胞颗粒中的过氧化物酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺，形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。
2、DAB是过氧化物酶重要的显色底物之一，能被催化生成水不溶性的棕黄色产物，能直观地观察到，适用于各种斑点检测和免疫组化中的染色步骤。
3、DAB是一种碱，在空气中迅速变暗，其盐酸盐为白色针状物，溶于水，其盐酸盐的水溶液可作显色液。
4、SP，但其实和ABC基本原理是一样的，生物素化的二抗孵育之后还需要一步是用HRP（或者其他酶类）标记的链霉卵白素复合物孵育使其与生物素结合，然后和DAB反应的是HRP。
5、一般免疫组化玻片都会用1~3%H2O2在显色之前处理一下，阻断内源性过氧化物酶，防止非抗原部位的非特异性染色。红细胞富含内源性的过氧化氢酶，若处理不彻底，因为残留的酶催化显色液中的H2O2而使DAB显色，会显棕黄色。
6、DAB显色剂是有毒的，所以操作是最好的口罩和手套。它主要是蛋白质和NH 2或SH基团结合，形成稳定的键或纳秒ン密钥，然后将DAB显色可以显示一个颜色组，已暴露于标记的蛋白，这表明我们的靶细胞蛋白的分布和类型以及等等。
DAB显色时红细胞的颜色什么
1、二染色结果：细胞核呈蓝色，细胞浆、肌纤维、胶原纤维和红细胞呈不同程度的红色。钙盐和细菌可呈蓝色或紫蓝色。三染色注意事项切片染色前，应彻底脱蜡。
2、DAB染色法也叫二氨基联苯胺法，用于检测细胞中过氧化物酶的活性部位。原理：细胞颗粒中的过氧化物酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺，形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。
3、“+” 红细胞大部分集中于中央，周围只有少数凝集，即25%凝集。 “++” 红细胞呈薄层凝集，中心致密，边缘分散，即50%凝集。 “+++” 红细胞凝集程度较上有所增加，即75%凝集。
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DAB是过氧化物酶重要的显色底物之一，能被催化生成水不溶性的棕黄色产物，能直观地观察到，适用于各种斑点检测和免疫组化中的染色步骤。
DAB染色法也叫二氨基联苯胺法，用于检测细胞中过氧化物酶的活性部位。原理：细胞颗粒中的过氧化物酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺，形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。
DAB是显色用的，DAB是HRP的底物，发生显色反应。
原理：DAB即二氨基联苯胺是过氧化物酶的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。
光度法分析金属离子时，为提高测定的灵敏度和选择性，会利用到显色试剂选择合适的显色剂与相应的金属离子反应，生成可见颜色的化合物再测定是可见光光度法分析金属离子时常用的方法。
许多无机试剂能与金属离子起显色反应，如与氨水反应生成深蓝色的配离子。⑴选择性好。一种显色剂最好只与被测组分起显色反应。干扰少，或干扰容易消除。⑵灵敏度高。
DAB染色液为什么会变深
1、）抗体浓度过高：一抗浓度过高是常见的原因之一。解决办法是，每次使用新抗体前应当对其工作浓度进行测试，使每一抗体个体化，找到适合自己实验室的理想工作浓度，既使是即用型的抗体也应如此，不能只简单的按说明书进行染色。
2、DAB染色法也叫二氨基联苯胺法，用于检测细胞中过氧化物酶的活性部位。原理：细胞颗粒中的过氧化物酶，能将过氧化氢中的氧释放出来，氧化二氨基联苯胺，形成金黄色沉淀而定位于过氧化物酶活性的部位。
3、细胞核着色过深：（1）盐酸溶液浓度不够。适当加入几滴盐酸以增加浓度。（2）制片用高于95%以上浓度的酒精固定后可以出现染色过深。应用95%酒精固定。
4、其含氢氧化物的浓度会下降，会导致滴定剂出现灰色沉淀，并且导致滴定终点的偏移。试剂氧化。过氧乙酸十分容易被氧化，受到紫外线、空气、高温等环境的影响会发生分解反应，会导致出现黑色絮状物质。
5、原理：DAB即二氨基联苯胺是过氧化物酶的生色底物，在过氧化氢的存在下失去电子而呈现出颜色变化和积累，形成浅棕色不溶性产物。
