为什么使用Taq酶,添加各组分的顺序有什么讲究
Taq酶是DNA聚合酶，起到连接作用。我一般是先加双蒸水，然后是buffer，再dNTP MIX，上下游引物，模板，最后是Taq酶。
在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。
因此Taq聚合酶取代了之前常用于PCR反应的大肠埃希菌中的DNA聚合酶。PCR反应中应用Taq聚合酶，不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷，大大降低了成本，PCR技术得以大量应用，并逐步应用于临床。
无法使用。补充一个知识点：TAQ酶又叫做热稳定DNA聚合酶，是在一种古核生物（嗜热菌）中发现的，这种菌体可以在海底的热泉中大量生存，因此他们的酶也对pcr有较大价值。纯手打，望采纳。
在PCR技术中，引物的作用是为了使脱氧核苷酸加到模板链上，使新链延长，没有引物，DNA聚合酶是不能将单个的脱氧核苷酸加到模板链上的。
RT-PCR产物电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样...
建议先找一个表达丰度高的体系，验证一下你的引物是否工作。
楼下说的对，最坏的可能是RNA没提出来，这也是常见情况。
其实，如果序列没有什么特别的，只有引物二聚体的话，通常要么是模板，要么是引物设计出问题了。因为体系中没有匹配的序列供引物去识别和结合，只能形成二聚体了。
那可能你的条件不是很适合，所以没有P出来，你可以改变模板的浓度，还可以改变退火温度，还可以加入Mg ，DMSO等。
第一，引物设计不当，blast验证引物或者重新设计引物 第二，扩增条件不对，可以适当调低退火温度和增加延伸时间 第三，PCR试剂或者RNA/cDNA模板有问题，拿个内参验证看看，像什么GAPDH，b-actin之类的基因。
最大的可能是转基因植物失败了，可能你转烟草成功了。
taqmix酶室温会加A尾吗
1、大部分耐热性DNA聚合酶在PCR反应时都有在PCR产物的3末端添加一个“A”的特性。这一步往往在72℃ 10分钟过程产生，Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A，因此PCR产物回收纯化后可以和T载体直接连接。
2、但是有实验表明，有些酶如高保真酶(pfu)则不加A尾。
3、这是这个酶的特性，由于没有3‘-5’外切酶的活性，不能把加上的A去掉。
4、大部分Taq会在每次扩增的3‘端加1个A（是在扩增到末端的时候，已经读到模版链5’结尾），不是polyA。因为这个多加的A和引物并不匹配，所以不会被进一步扩增，PCR产物只有3’的一个A。机制未知。
5、这是Taq酶的特点，会在产物链末端（3‘端）加上一个A。因此经Taq DNA聚合酶扩增后的PCR产物末端都带有单个A。
6、那是用的Taq酶，Taq酶可以在pcr产物的3末端加上1个A。做TA克隆的时候，用Taq酶在pcr产物末端加上一个A，（DNA是双链，自然两端各有一个A），T载体已经切开，切口两端都有一个T，然后TA配对，连接。
